肌酐(Cr)测定试剂盒苦味酸法说明书
分光光度法50管/48样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:肌酐是在肌肉中从磷酸肌酸通过自发和不可逆转化而形成的,除非肌肉质量有大的变化,通常情况所形成的肌酐量是相当恒定的。游离肌酐的循环量完全依赖于它的排泄速度,从而测定尿液,血清或血浆中的肌酐量,可用于肾功能检查。肌酐含量的增高常见于:慢性肾衰竭时排泄量的减少及肢端肥大症。
测定原理:肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐。在波长490nm处有最大吸收峰,在一定的时间内测定该复合物,即可计算出样本中肌酐的含量,并可避免干扰。
肌酐+碱性苦味酸————肌酐苦味酸复合物
自备仪器和用品:
可见分光光度计、普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存,临用前过滤。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:10x 标准液×1 瓶,4℃保存,临用前,蒸馏水10倍稀释1x标准液,终浓度为0.1 mg/ml。
*工作液配置:试剂二:试剂一 = 1:10(临用前配置,用多少配多少)。
样本收集:
1.血清,血浆,血清或血浆中的肌酐在 2-8℃下可保存 24 小时。
2.尿液:试验前将新鲜尿液用蒸馏水作1/50稀释,测定结果乘以50。
肌酐(Cr)测定试剂盒苦味酸法
测定操作:
1. 分光光度计预热30min,调节波长到490nm,蒸馏水调零。
2,按下表添加样本试剂,充分混匀,置37℃水浴30秒钟后,选择波长490nm,以空白管校零读取起始吸光度(A1),90秒钟后读取终末吸光度(A2)
备注:可根据使用仪器的不同,恒比例改变试剂与样本的量。
注意:空白管只需要做一次
肌酐(Cr)测定试剂盒苦味酸法
试剂名称(μL) | 样本管 | 空白管 | 标准管 |
样本 | 100 |
|
|
试剂三 1X |
|
| 100 |
蒸馏水 |
| 100 |
|
工作液 | 1000 | 1000 | 1000 |
计算公式:
肌酐(Cr)测定试剂盒苦味酸法
注意事项:
1、本方法的最低检出浓度为0.03 g/L(取样体积为0.1 mL)、线性范围为O~l.0g/L r = O.9995, 精密度:相对标准偏差为0.38%~2.2%(浓度为0.2~1.0g/L.n =6), 准确度:尿样加标平均回收率为93% ~105% (肌酐浓度为0.35~0.57g/Ln = 6)。本法测定中的最小取样量为50uL。
2、尿样中含有0.1mg/L的镍、汞、硒、钒,0.2mg/L的铬,0.3mg/L的杀虫脒,0.4mg/L的镉、对硝基酚,0.6mgL的铅、砷,1mg/L的马尿酸及甲基马尿酸,16mg/L的2-硫代噻唑烷-4-羧酸,2mg/L的氟,3mg/L的酚,100mg/L的三氯乙酸,400mg/的扁桃酸,1000mg/L 的苯乙醛酸,不干扰测定。
3、反应温度、苦味酸纯度及其浓度、氢氧化钠浓度均对测定值有影响。反应温度必须控制在30℃以下。加水至10mL混匀后应尽快完成标准和样品的测定,从最先开始测定至最后一个样品结束,整个比色过程必须控制在30min内完成。
4、血红蛋白(0.1mg/L),胆红素(10mg/dL),前体及蛋白质均不干扰反应,但高浓度的还原物质会影响测定结果。
5、本产品在岛津-UV1601PC 型仪器上通过第三方检测,用于其他仪器需进行验证。
6、中华人民共和国卫生行业标准 尿中肌酐分光光度测定方法
(Urine-Determination of creatinine -Spectrophotometric method)
WS/T 9 7 - 1 9 9 6
参考文献:
1.Fabiny DLetal.ClinChem1971:17:696
2.Young DS,etal.ClinChem1975:21:286-288
肌酐(Cr)测定试剂盒苦味酸法