中性粒(PMNs)的吞噬作用在抵御细菌、真菌等病原微生物感染过程中发挥重要作用。吞噬作用过程包括几个主要阶段: 趋化,黏附,内吞,胞内氧依赖性(呼吸爆发)和氧非依赖性的杀伤。 正常条件下细菌感染后,机体PMNs被激活,PMNs吞噬和氧化功能增强是机体重要的天然免疫防御机制。因此通过观察PMNs的活化状态可以帮助了解机体细菌感染的状况。 本试剂盒采用流式细胞仪(FMC)检测PMNs功能,用PMA作为高效刺激剂,以二氢若丹明作为荧光底物。中性粒细胞受刺激后产生反应性氧化物,氧化二氢若丹明为可发出荧光的若丹明123。这个反应可以由溶血素终止。产生的反应性氧化物可以用荧光强度来表示。 PMNs活化和机体的天然免疫能力。可用于研究在各种病理情况下如感染、自身免疫疾病、应急、肿瘤、手术等中中性粒细胞的功能改变及药物的效果评价。 该试剂盒不仅用于人,还可以用于小鼠、大鼠、兔、狗、牛等其他种属。
产品组分 PMA溶液
二氢若丹明
溶血素
操作步骤
1. 无菌肝素抗凝的全血50ul,加刺激剂(如PMA)50ul, 37°C 孵育15分钟。
2.加二氢若丹明25ul, 37°C避光孵育5分钟
3.溶血素用无菌去离子水1:10稀释,加稀释后的溶血素1ml ,室温避光溶血15分钟
4.PBS洗涤2次,1500rpm离心5分钟,去上清液
5.加0.5mlPBS重悬细胞,上流式细胞仪检测
参考文献 | 1 Sawyer, D.W., Donowitz, G.R. & G.L. Mandell. 1989. Polymorphonuclear neutrophils: An effective antimicrobial force. Rev. Infect. Dis. 11: S1532-S1544. 2.Richardson MP, Ayliffe MJ, Helbert M, et al. A simple flow cytometry assay using dihydrorhodamine for the measurement of the neutrophil respiratory burst in whole blood: comparison with the quantitative nitrobluetetrazolium test. J Immunol Methods,1998,219(1-2):187-193. 3.Smith, R.M. & J.T. Curnutte. 1991. Molecular basis of chronic granulomatous disease. Blood 77: 673 -686. 4.Jirapongsananuruk O, Malech HL, Kuhns DB, et al. Diagnostic paradigm for evaluation of male patients with chronic granulomatous disease, based on the dihydrorhodamine 123 assay. J Allergy Clin Immunol. 2003,111(2):374-9. 5.Walrand S, Valeix S, Rodriguez C, et al. Flow cytometry study of polymorphonuclear neutrophil oxidative burst: a comparison of three fluorescent probes. Clin Chim Acta, 2003, 331(1-2):103-110. 6.Rothe G, Oser A & G. Valet. 1988. Dihydrorhodamin 123: a |
| 前向角、侧向角点状图谱 |
| 静止、活化中性粒细胞FL1荧光柱状图谱 |