植物根系活力检测试剂盒(萘胺微板法)
产品简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。根系能氧化萘胺生成红色的萘胺化合物，根系对萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切联系。可以根据根系表面着色深浅，通过定量溶液中未被氧化的萘胺的量，以定量测定根系活力。
植物根系活力检测试剂盒(萘胺微板法)检测原理是在弱酸性条件下，以萘胺为底物，萘胺与对氨基苯磺酸、亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮化合物，用酶标仪检测510nm处吸光度，以吸光度变化所需萘胺进行计算，该试剂盒主要用于定量测定植物根系活力。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。4℃,避光,6个月
产品组成：
编号 名称 | TP1011 100T | Storage |
试剂(A): 萘胺标准(5mg/ml) | 5ml | 4℃ 避光 |
试剂(B): 根系Assay Buffer | 2×250ml | RT |
试剂(C): 磺胺酸显色液 | 1.5ml | RT 避光 |
试剂(D): 亚硝酸显色液 | 1.5ml | 4℃ 避光 |
使用说明书 | 1份 |
自备材料： 1、蒸馏水
2、实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等
3、研钵或匀浆器
4、离心管或试管
5、低温离心机
6、恒温箱或水浴锅
7、分光光度计、比色杯 编号 名称 TO1123 50T Storage 试剂(A): NO2-标准(1mM) 1ml 4℃ 试剂(B): O2- Lysis buffer 125ml 4℃ 试剂(C): 羟胺溶液 30ml 4℃ 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 30ml 4℃ 避光 试剂(E): 萘胺显色液 30ml 4℃ 避光 使用说明书 1 份
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品： ①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取 1~1.5g， 加入 2ml 预冷的 O2- Lysis buffer 后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃ 10000g 离心 10min， 上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测 定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。 ③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、配制系列 NO2-标准溶液：取出 NO2-标准(1mM)恢复至室温后，以 NO2-标准(1mM) 按下表继续稀释：
3、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意 避免产生气泡。如果样品中的超氧阴离子自由基浓度过高，可以减少样品用量或适当稀 释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
4、O2-测定：以空白调零，比色杯光径 1cm，分光光度计测定标准管、测定管 530nm 处 吸光度(即为 A 标准、A 测定)。
计算： 以系列 NO2-标准(1~6 号)含量(μM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲 加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 NO2-标准(1mM) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸馏水 0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 1 — — 系列 NO2-标准(1~6 号) — 1 — 待测样品 — — 0.25 O2- Lysis buffer — — 0.25 羟胺溶液 — — 0.5 混匀，25℃水浴孵育 20min。 氨基苯磺酸显色液 0.5 0.5 0.5 萘胺显色液 0.5 0.5 0.5 混匀，30℃水浴孵育 30min。根据测定管的吸光度进而计算 NO 2-含量。
根据如下公式计算具体样品中超氧阴离子自 由基(O2-)的含量： 植物组织样品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS) 血清、尿液等样品 O2-(μM/ml)=2×n×N/VS 超氧阴离子的产生速率的定义：每分钟每克鲜重组织产生的超氧阴离子的物质的量，计 算公式如下： 超氧阴离子产生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS) 测得样品中蛋白质含量后，可用下面公式表示： 超氧阴离子产生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS) 式中：2=NO2-与 O2-间的化学计量数 n=从标准曲线上查得的 NO2-含量(μM) VT=超氧阴离子自由基提取液总体积(ml) N=样品稀释倍数 W=样品鲜重(g) m=样品中蛋白质含量(mg) t=样品与羟胺的反应时间(min)=20 VS=测定时加入提取液体积(ml)
注意事项：
1、 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于 4℃。
2、 如果样品中含有较多的叶绿素，会干扰测定结果，可在加入羟胺溶液 25℃水浴孵育 20min 后用等体积乙醚或三氯甲烷萃取叶绿素，再行显色反应。
3、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
4、 所测样本的浓度过高，应用 O2- Lysis buffer 稀释样品后重新测定。
5、 氨基苯磺酸显色液和萘胺显色液有强烈的刺激性，尽量在通风条件好的地方操作，用后 需拧紧瓶盖，避免挥发。
有效期：6 个月有效。4℃运输，4℃保存。
物根系活力检测试剂盒(萘胺微板法)相关产品： 附：参考标准曲线范围： Leagene 测定 NO2-标准 10、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200μM 在 530nm 的吸光度，据此做出其标准曲线如下： 根据结果可以看出 NO2-标准在 160μM 以上时，OD 值会有偏差，因此样品的 O2-应小于 320μM
